Determinación de clorofila en plantas con el espectrofotómetro HI802
La cuantificación de clorofila en tejidos vegetales es un indicador clave del estado fisiológico de las plantas, especialmente en estudios agronómicos, nutricionales y de estrés ambiental.
La clorofila es un pigmento esencial en los organismos fotosintéticos, responsable de la captación de la luz solar para convertirla en energía química. En las plantas superiores existen principalmente dos tipos de clorofila:
Clorofila a
- Función: Es el pigmento fotosintético principal. Participa directamente en las reacciones fotoquímicas de la fotosíntesis.
- Absorbe luz: Principalmente en las longitudes de onda azul-violeta (~430 nm) y rojo (~663 nm).
- Color: Azul verdoso.
- Presente en: Todas las plantas, algas verdes, algas rojas y cianobacterias.
Importancia analítica: La clorofila a es un indicador directo de la capacidad fotosintética activa de la planta. Su reducción puede reflejar estrés, deficiencia nutricional (como nitrógeno), daño por plagas, entre otros.
Clorofila b
- Función: Es un pigmento accesorio, que amplía el espectro de luz utilizable en la fotosíntesis y transfiere energía a la clorofila a.
- Absorbe luz: En el rango azul (~455 nm) y naranja (~645 nm).
- Color: Verde amarillento.
- Presente en: Plantas superiores y algas verdes (no en cianobacterias ni algas rojas).
Importancia analítica: Aunque no participa directamente en la reacción fotoquímica, su concentración refleja la adaptación de las plantas a diferentes condiciones de luz y también puede cambiar ante estrés ambiental o envejecimiento de hojas.
La AOAC en la metodología 992.04 detalla la medición de clorofila en vegetales basándose en la extracción de pigmentos con solventes orgánicos (generalmente acetona o etanol al 80%) y la lectura espectrofotométrica en longitudes de onda específicas:
- Clorofila a: 663 nm
- Clorofila b: 645 nm
- Cálculo total: basado en fórmulas empíricas derivadas de la absorbancia
El HI802 permite realizar mediciones fotométricas rápidas y confiables, con soporte para múltiples longitudes de onda y calibración automática. Su compatibilidad con celdas estándar de 10 mm lo hace ideal para ensayos con extractos vegetales.
Para realizar el procedimiento se requiere seleccionar el tejido vegetal frescos, libre de suciedad o daño, este tejido se tritura y se sumerge en acetona al 80% en un ambiente oscuro o protegido de la luz directa, posteriormente se separa el sobrenadante limpio para lectura en el espectrofotómetro a 2 longitudes de onda: 645 y 663 nm e ingresando las fórmulas de suma descritas a continuación para poder cuantificar cada uno de los tipos de clorofila.
Fórmulas de Cálculo (según AOAC) :
- Clorofila a=(12.7×A663)−(2.69×A645)
- Clorofila b=(22.9×A645)−(4.68×A663)
- Clorofila total=(20.2×A645)+(8.02×A663)
- Donde A663y A645son las absorbancias medidas.
La posibilidad de ingresar fórmulas al espectrofotómetro para el cálculo de concentraciones es una función que hace al equipo la opción perfecta para los análisis colorimétricos con gran exactitud y facilidad de uso.
Especificaciones del HI802
| Intervalo de longitud de onda | 340 a 900 nm |
| Resolución de longitud de onda | 1 nm |
| Exactitud de longitud de onda | ±1 nm |
| Modos de medición | Transmitancia (% T), absorbancia (abs), concentración con elección de unidades (ppm, mg/L, ppt, ºf, ºe, ppb, meq/L, μg/L, PCU, Pfund, pH, dKH, ºdH, meq /kg o sin unidad de medida) |
| Selección de longitud de onda | Automático, basado en el método seleccionado (editable solo para métodos de usuario) |
| Fuente de luz | Lámpara halógena de tungsteno |
| Sistema óptica | Detectores de luz de referencia y de muestra de haz dividido. |
| Calibración de longitud de onda | Interno, automático al encender, retroalimentación visual. |
| Luz perdida | <0,1 % T a 340 nm con NaNO2 |
| Ancho de banda espectral | 5 nm (ancho total a la mitad como máximo) |
| Celda de muestra | Redondo de 16 mm, redondo de 22 mm, vial de 13 mm, cuadrado de 10 mm, rectangular de 50 mm (con detección automática) |
| Programas (Fábrica/Usuario) | Hasta 150 de fábrica (85 precargados); hasta 100 usuarios desarrollados |
| Puntos de datos almacenados | 9999 valores medidos |
| Capacidad de exportación | Formato de archivo .csv, formato de archivo .pdf |
| Conectividad | (1) USB – A (host de almacenamiento masivo); (1) USB – B (dispositivo de almacenamiento masivo) |
| Tipo de batería / duración | 3000 mediciones u 8 horas |
| Fuente de alimentación | Adaptador de corriente de 15 VCC; Batería recargable de iones de litio de 10,8 VCC |
| Condiciones ambientales | 0 a 50 ºC (32 a 122 ºF); 0 a 95% de humedad relativa |
| Dimensiones | 155 x 205 x 322 mm (6.1 x 8.0 x 12.6”) |
| Peso | 3 kg (6.6 lbs) |